我不知道你是要在一个载体上表达两个不同的蛋白还是串联表达两个相同的蛋白，如果是表达分别表达两个不同的蛋白，即便各自的基因含有必需的表达元件，往往会出现首先表达的量很高，后面的很低，这种差别可能会很大，如果你第二段目的基因的起始密码子效果不够强的话很可能后面的基因就不表达了；如果是串联表达相同的蛋白只需在两段基因间加上合适的接头（含有某种切割位点）在同一个开放阅读框内就可以表达。起始密码子和终止密码子的效率对蛋白表达至关重要，启动效率不够表达量就会很低或者压根就不表达，终止效率低的话会发生通读，结果就会得不到你想要的蛋白。至于表达终止于载体上的终止子还是mRNA上的终止密码子，你所的情况我不是很清楚，希望有高手能够指点一下，我个人觉得还是看两者的效率，如果mRNA上的终止密码子效率足够高的话也是可以终止表达，不知道我的理解对不对！
